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雞馬立克氏病核酸試劑盒

產品型號:

廠商性質:生產廠家

訪問量:1290

更新時間:2020-04-09

簡要描述:

?雞馬立克氏病核酸試劑盒

馬立克氏?。∕DV)是雞的一種淋巴組織增生性腫瘤病,其特征為外周神經淋巴樣細胞浸潤和增大,引起肢(翅)麻痹,以及性腺、虹膜、各種臟器、肌肉和皮膚腫瘤病。本試劑盒利用實時熒光PCR原理,主要用于雞馬立克氏病的定性篩查檢測及療效評估有重要指導意義.

詳細說明:

雞馬立克氏病核酸試劑盒

【預期用途】

?雞馬立克氏病核酸試劑盒

馬立克氏病(MDV)是雞的一種淋巴組織增生性腫瘤病,其特征為外周神經淋巴樣細胞浸潤和增大,引起肢(翅)麻痹,以及性腺、虹膜、各種臟器、肌肉和皮膚腫瘤病。本試劑盒利用實時熒光PCR原理,主要用于雞馬立克氏病的定性篩查檢測及療效評估有重要指導意義.

【檢驗原理】

本試劑盒針對MDV高度保守區(qū)域設計特異性引物和探針,在反應體系中含MDV基因組模板的情況下,PCR反應得以進行并釋放熒光信號。利用儀器對PCR過程中相應通道的信號強度進行實時監(jiān)測和輸出,實現(xiàn)檢測結果的定性分析。

注:陰性對照為基因組DNA,陽性對照為MDV經滅活處理的核酸提取物。

【儲存條件及有效期】避光-20以下保存,避免反復凍融,有效期12個月。

【適用儀器】ABI 系列、Bio-Rad系列、Agilent Stratagene MX系列、Roche LightCycler R480、Cepheid SmartCycler、Rotor-Gene系列、杭州博日系列等多通道實時熒光定量PCR儀。

【樣本要求】

1.活禽樣品取咽喉拭子和泄殖腔拭子,采集方法如下:

(1) 咽喉拭子,采取時要將拭子深入喉頭及上愕裂來回刮3次~5次,取咽喉分泌液;

(2) 泄殖腔拭子,將拭子深入泄殖腔轉一圈沾取糞便;

(3) 將咽喉拭子和泄殖腔拭子一起放入盛有 1.0 mL 生理鹽水的離心管中備用。

2.血液或血清樣品:使用無菌注射液抽取樣品置于離心管中待檢。

3.肌肉或內臟樣品:取少量樣品(2~3克)于研缽或勻漿器中研磨,然后將研磨勻漿轉入無菌離心管中,3000rpm/min 離心10分鐘取上清待檢。

4.應避免標本間交叉污染。

5.標本收集后可立即檢測;若不能立即檢測,可置于2~8冷藏過夜保存;如需長期保存,標本應凍存于-80℃以下,避免反復凍融

【檢驗方法】

1. 試劑準備(試劑準備區(qū))

(1)從冰箱中取出試劑盒, 從試劑盒中取出實驗所需試劑,充分融化混勻并瞬時離心以去除管壁附著液體。

(2)核算當次實驗所需要的反應數(shù)(n),并根據(jù)如下表所示反應體系計算當次實驗所需要的各種試劑量。

n =陰性對照數(shù)(1T)+陽性對照數(shù)(1T)+誤差預留量(1T)+樣本數(shù)

單反液配制表(每份)

PCR反應液

17.5 μL

混合酶液(Taq酶+UNG酶)

 2.5 μL

(3)在無菌離心管中加入上述試劑,充分混勻后瞬時離心。按照20 μL/管分裝量將試劑分裝至PCR反應管。

(4)蓋緊PCR反應管蓋后將PCR反應管轉移至樣本處理區(qū)。剩余試劑放回-20以下冰箱冷凍保存。

2.樣本準備(樣本處理區(qū))

用QIAGEN、Roche公司DNA提取試劑盒提取DNA,具體操作按照其試劑盒說明書操作。

3.加樣

在上述制備好的PCR反應樣本管中分別加入處理好的待測標本DNA各5μl、終體積25μl/管,蓋好PCR反應蓋混勻后瞬時低速離心,轉移到PCR儀器上。陰性對照和陽性對照管則各加5μL試劑盒自帶的陰性對照或陽性對照品,終體積為25μl/管,蓋好PCR反應蓋混勻后瞬時低速離心,轉移到PCR儀器上。

4.PCR(PCR擴增區(qū))

(1)取樣本處理區(qū)準備好的PCR反應管,放置在實時熒光定量PCR儀樣品槽相應位置,并記錄放置順序。

(2)按下表設置儀器核酸擴增相關參數(shù)進行PCR擴增。

 

 

反應體積

25 μL

通道選擇

FAM通道采集MDV熒光信號

PCR

反應

條件

步驟

條件

循環(huán)數(shù)

UNG處理

 50:2分鐘(min)

1

預變性

 95:3分鐘(min)

1

預擴增

95:5秒(s)

5

55:40秒(s)

PCR擴增

95:5秒(s)

40

55:40秒(s)

(此階段結束時采集熒光信號)

注:ABI系列熒光PCR儀在設置時不選ROX校正,設置淬滅基團選擇None。

【參考值(參考范圍)】

1.試劑盒有效性判定:

(1)陽性對照:有典型S型擴增曲線或Ct值≤35。

(2)陰性對照:Ct值>38或無Ct值,線形為直線或輕微斜線,無指數(shù)增長期。

2.標本結果判定:

(1)陽性:標本檢測結果Ct值≤35或有明顯指數(shù)增長期。

(2)可疑:標本檢測結果Ct值在35~38范圍內。此時應對標本進行重復檢測,如重復實驗結果Ct值仍在35~38范圍內,有明顯指數(shù)增長期,則判定為陽性,否則為陰性。

(3)陰性:標本檢測結果Ct值>38或無Ct值。

 

【預期用途】

馬立克氏病(MDV)是雞的一種淋巴組織增生性腫瘤病,其特征為外周神經淋巴樣細胞浸潤和增大,引起肢(翅)麻痹,以及性腺、虹膜、各種臟器、肌肉和皮膚腫瘤病。本試劑盒利用實時熒光PCR原理,主要用于雞馬立克氏病的定性篩查檢測及療效評估有重要指導意義.

【檢驗原理】

本試劑盒針對MDV高度保守區(qū)域設計特異性引物和探針,在反應體系中含MDV基因組模板的情況下,PCR反應得以進行并釋放熒光信號。利用儀器對PCR過程中相應通道的信號強度進行實時監(jiān)測和輸出,實現(xiàn)檢測結果的定性分析。

注:陰性對照為基因組DNA,陽性對照為MDV經滅活處理的核酸提取物。

【儲存條件及有效期】避光-20以下保存,避免反復凍融,有效期12個月。

【適用儀器】ABI 系列、Bio-Rad系列、Agilent Stratagene MX系列、Roche LightCycler R480、Cepheid SmartCycler、Rotor-Gene系列、杭州博日系列等多通道實時熒光定量PCR儀。

【樣本要求】

1.活禽樣品取咽喉拭子和泄殖腔拭子,采集方法如下:

(1) 咽喉拭子,采取時要將拭子深入喉頭及上愕裂來回刮3次~5次,取咽喉分泌液;

(2) 泄殖腔拭子,將拭子深入泄殖腔轉一圈沾取糞便;

(3) 將咽喉拭子和泄殖腔拭子一起放入盛有 1.0 mL 生理鹽水的離心管中備用。

2.血液或血清樣品:使用無菌注射液抽取樣品置于離心管中待檢。

3.肌肉或內臟樣品:取少量樣品(2~3克)于研缽或勻漿器中研磨,然后將研磨勻漿轉入無菌離心管中,3000rpm/min 離心10分鐘取上清待檢。

4.應避免標本間交叉污染。

5.標本收集后可立即檢測;若不能立即檢測,可置于2~8冷藏過夜保存;如需長期保存,標本應凍存于-80℃以下,避免反復凍融

【檢驗方法】

1. 試劑準備(試劑準備區(qū))

(1)從冰箱中取出試劑盒, 從試劑盒中取出實驗所需試劑,充分融化混勻并瞬時離心以去除管壁附著液體。

(2)核算當次實驗所需要的反應數(shù)(n),并根據(jù)如下表所示反應體系計算當次實驗所需要的各種試劑量。

n =陰性對照數(shù)(1T)+陽性對照數(shù)(1T)+誤差預留量(1T)+樣本數(shù)

單反液配制表(每份)

PCR反應液

17.5 μL

混合酶液(Taq酶+UNG酶)

 2.5 μL

(3)在無菌離心管中加入上述試劑,充分混勻后瞬時離心。按照20 μL/管分裝量將試劑分裝至PCR反應管。

(4)蓋緊PCR反應管蓋后將PCR反應管轉移至樣本處理區(qū)。剩余試劑放回-20以下冰箱冷凍保存。

2.樣本準備(樣本處理區(qū))

用QIAGEN、Roche公司DNA提取試劑盒提取DNA,具體操作按照其試劑盒說明書操作。

3.加樣

在上述制備好的PCR反應樣本管中分別加入處理好的待測標本DNA各5μl、終體積25μl/管,蓋好PCR反應蓋混勻后瞬時低速離心,轉移到PCR儀器上。陰性對照和陽性對照管則各加5μL試劑盒自帶的陰性對照或陽性對照品,終體積為25μl/管,蓋好PCR反應蓋混勻后瞬時低速離心,轉移到PCR儀器上。

4.PCR(PCR擴增區(qū))

(1)取樣本處理區(qū)準備好的PCR反應管,放置在實時熒光定量PCR儀樣品槽相應位置,并記錄放置順序。

(2)按下表設置儀器核酸擴增相關參數(shù)進行PCR擴增。

 

 

反應體積

25 μL

通道選擇

FAM通道采集MDV熒光信號

PCR

反應

條件

步驟

條件

循環(huán)數(shù)

UNG處理

 50:2分鐘(min)

1

預變性

 95:3分鐘(min)

1

預擴增

95:5秒(s)

5

55:40秒(s)

PCR擴增

95:5秒(s)

40

55:40秒(s)

(此階段結束時采集熒光信號)

注:ABI系列熒光PCR儀在設置時不選ROX校正,設置淬滅基團選擇None。

【參考值(參考范圍)】

1.試劑盒有效性判定:

(1)陽性對照:有典型S型擴增曲線或Ct值≤35。

(2)陰性對照:Ct值>38或無Ct值,線形為直線或輕微斜線,無指數(shù)增長期。

2.標本結果判定:

(1)陽性:標本檢測結果Ct值≤35或有明顯指數(shù)增長期。

(2)可疑:標本檢測結果Ct值在35~38范圍內。此時應對標本進行重復檢測,如重復實驗結果Ct值仍在35~38范圍內,有明顯指數(shù)增長期,則判定為陽性,否則為陰性。

(3)陰性:標本檢測結果Ct值>38或無Ct值。

 



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